梯度液相色譜儀是一款新型的液相色譜儀,梯度系統的應用范圍比等度系統更廣,等度系統不能很好分離的物質(zhì),使用梯度程序便能迎刃而解,可設定自動(dòng)清洗程序而不需手動(dòng)更換流動(dòng)相,使色譜柱的清洗更方便,廣泛用于研究開(kāi)發(fā)、醫藥檢驗、食品檢測、化工分析、環(huán)境監測等眾多分析領(lǐng)域。
梯度洗脫又稱(chēng)為梯度淋洗或程序洗脫。氣相色譜中為改善對寬沸程樣品的分離和縮短分析周期,廣泛采用程序升溫的方法。而在液相色譜中則采用梯度洗脫的方法。在同一個(gè)分析周期中,按一定程度不斷改變流動(dòng)相的濃度配比,稱(chēng)為梯度洗脫。從而可以使一個(gè)復雜樣品中的性質(zhì)差異較大的組分能按各自適宜的容量因子k達到良好的分離目的。
梯度洗脫原理是流動(dòng)相由幾種不同極性的溶劑組成,通過(guò)改變流動(dòng)相中各溶劑組成的比例改變流動(dòng)相的極性,使每個(gè)流出的組分都有合適的容量因子k,并使樣品種的所有組分可在最短時(shí)間內實(shí)現最佳分離。
梯度洗脫可提高柱效,改善檢測器的靈敏度。當樣品中的一個(gè)峰的k值和最后一個(gè)峰的k值相差幾十倍至幾百倍時(shí),使用梯度洗脫效果特別好。梯度洗脫中為保證流速的穩定,必須使用恒流泵,否則難獲重復結果。梯度洗脫常用一個(gè)弱極性的溶劑A和一個(gè)強極性的溶劑B。
梯度液相色譜儀洗脫應滿(mǎn)足以下要求:
1.洗脫液體積應足夠大,一般要幾十倍于床體積,從而使分離的各峰不致于太擁擠。
2.梯度的上限要足夠高,使緊密吸附的物質(zhì)能被洗脫下來(lái)。
3.梯度不要上升太快,要恰好使移動(dòng)的區帶在快到柱末端時(shí)達到解吸狀態(tài)。
目的物的過(guò)早解吸,會(huì )引起區帶擴散;而目的物的過(guò)晚解吸會(huì )使峰形過(guò)寬。