HPLC分析,尤其是正相色譜的分析受溫度的影響特別大,反相分析一般受影響不大,有些物質(zhì)的分析必須在固定的溫度下進(jìn)行。之前用鈣柱做過(guò)葡萄糖的分析,要求必須柱溫85度。
而在色譜定性方法中,柱溫變化對定性結果的影響如下:
?、佼敳捎媒^對保留值定性時(shí),其他色譜條件不變,柱溫變化時(shí),保留時(shí)間就會(huì )發(fā)生變化,這樣就直接影響定性結果判斷。
?、诋敳捎孟鄬ΡA糁?alpha;定性時(shí),α只是柱溫和固定液的函數,只與待測組分的熱力學(xué)性質(zhì)有關(guān),消除了外界因素的影響,因此跟柱溫變化關(guān)系不大,但是柱溫變化影響判斷結果。
?、郛敳捎帽A糁笖刀ㄐ詴r(shí),恒溫分析,保留指數與保留時(shí)間有關(guān),而柱溫影響保留時(shí)間變化;程序升溫分析,除了保留時(shí)間,保留指數還與保留溫度有關(guān)。因此,這種定性方法易受柱溫變化影響。
?、墚敳捎眉儤盈B加法定性時(shí),已知混合物中含某組分,將該組分的純樣加入,觀(guān)察加入前后的響應信號變化。柱溫變化,保留時(shí)間變化,但是加入前后的樣品影響信號變化是一致的,因此柱溫變化不影響采用這種方法定性的結果。
而在定量計算時(shí),經(jīng)常要用到校正因子,如重量校正因子,和組分的質(zhì)量以及響應信號有關(guān)。柱溫變化,峰高變化,峰面積不變,因此,在柱溫變化不影響峰形正常的前提下,以峰高為響應信號的重量校正因子,受柱溫影響,而以峰面積為響應信號的重量校正因子將不受影響。常見(jiàn)定量方法中,在柱溫波動(dòng)不影響出峰效果的前提下,對定量結果的影響如下:
?、俨捎脷w一化法時(shí),定量時(shí)需要各組分的校正因子,當以峰面積為響應信號時(shí),定量結果不受影響,以峰高為響應信號則受影響。
?、诓捎脙葮朔〞r(shí),需要計算定量校正因子,影響規律和①同。
?、鄄捎猛鈽朔〞r(shí),即標準曲線(xiàn)法,當以峰面積為響應信號時(shí),不受影響,但是當以峰高為響應信號時(shí),影響很大。
總之,柱溫變化可能會(huì )導致定性、定量分析結果的變化。